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外泌体蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种方法得到的外泌体样品中提取总蛋白。
本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解外泌体膜组份，本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。
本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白，下游应用范围广，提取液裂解细胞的能力较温和，需要根据实际样本情况优化裂解时间。
本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
本试剂盒提取的蛋白样本含高浓度盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用其他货号的试剂盒。也可将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理（HR0389）。
试剂盒以外自备试剂和仪器
● 离心机● 振荡器● 涡旋混匀器● 蛋白定量试剂盒

组份	50T	100T
组份A：总蛋白提取液A	20mL	40mL
组份B：蛋白酶抑制剂混合物B	100μL	200μL

蛋白提取液2～8℃保存；蛋白酶抑制剂-20℃保存。有效期1年。
注：
● 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2～8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
● 蛋白酶抑制剂在2～8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。


● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 蛋白酶抑制剂在2～8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
● 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
● 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
● 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
● 下游实验如果是进行特定蛋白酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。

• 提取液准备：
  每500μL冷的蛋白提取液中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
  注：
  ● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
  ● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
  ● 蛋白样品用于测定某些蛋白酶活性等下游实验时，注意根据实际情况调整抑制剂混合物是否加入。
  ● 以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。
  
• 每50μL外泌体样品中加入50μL冷的蛋白提取液，吹打混匀后，在4℃条件下振荡20～30分钟。
  注：
  ● 置振荡器上使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
  ● 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。
  ● 未用液体重悬的外泌体样本沉淀中直接加入蛋白提取液进行提取也可。
  
• 在4℃,12000×g条件下离心15分钟。
  
• 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到外泌体总蛋白。
  
• 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
  注：
  ● 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
  ● 蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
  ● 外泌体蛋白样品通常浓度极低，定量前不能像细胞蛋白裂解液进行大比例的稀释，可以直接上样定量，或者进行较低比例的稀释。

● 蛋白浓度低？
外泌体蛋白含量较少，需要较多的外泌体样本才能得到足够的蛋白样品用于下游实验。在条件允许的情况下，尽可能加大外泌体提取时的培养基上清、血清、体液等样本的上样量。
不同细胞培养上清提取得到的外泌体蛋白量差异较大，大多数细胞的参考值为0.1μg蛋白/106细胞。
处理部分外泌体样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
● 用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
● 提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
● 外泌体WB标志蛋白用什么？
在进行WB检测时，通常检测外泌体标志蛋白为CD63、CD9、CD81、TSG101、ALIX、HSP70等。
● 进行外泌体WB鉴定时有什么内参蛋白可供选择？
没有，该检测属于定性检测。
相关搜索：外泌体蛋白提取试剂盒，Exosomes Protein Extraction Kit